ग्राम दाग कैसे करें

ग्राम धुंधला एक त्वरित प्रक्रिया है जो ऊतक नमूनों में बैक्टीरिया की उपस्थिति को सत्यापित करने के लिए और उनके सेल दीवारों के रासायनिक और भौतिक गुणों के आधार पर उन्हें ग्राम-पॉजिटिव या ग्राम-नकारात्मक के रूप में पहचानने के लिए उपयोग किया जाता है। ग्राम दाग हमेशा एक जीवाणु संक्रमण का निदान करने में पहला कदम होना चाहिए।

इस अभ्यास का नाम डेनिश वैज्ञानिक के नाम पर है हंस क्रिश्चियन ग्राम (1853-19 38), जिन्होंने इसे 1882 में विकसित किया और 1884 में इसे समान नैदानिक ​​लक्षणों के साथ दो प्रकार के जीवाणुओं को भेदाने के लिए एक तकनीक के रूप में प्रकाशित किया: स्ट्रेप्टोकोकस न्यूमोनिया (जिसे न्यूमोकोकस भी कहा जाता है) और क्लेबसीला निमोनिया

कदम

भाग 1

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स्लाइड को निर्वहन करें यदि यह गंदे है, तो इसे तेल और भूरे को हटाने के लिए साबुन और पानी से धो लें। फिर इसे इथेनॉल, एक गिलास क्लीनर या किसी अन्य विधि द्वारा प्रयोगशाला प्रक्रियाओं द्वारा अनुशंसित किया जाता है जहां आप काम करते हैं।

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स्लाइड पर एक सरल नमूना रखें आप मेडिकल नमूना या पेट्री डिश की संस्कृति पर मौजूद बैक्टीरिया की पहचान करने के लिए ग्राम स्टेनाइजिंग तकनीक का उपयोग कर सकते हैं। ग्राम के लिए उपयोगी होना दाग के लिए, आपको एक जोड़ना होगा पतला डाई पर नमूना परत 24 घंटे से ज्यादा उम्र के नमूने पर काम करना बेहतर होता है, क्योंकि इस समय के बाद, एक बड़ा मौका है कि जीवाणुओं के सेल झिल्ली क्षतिग्रस्त हो जाते हैं और इसलिए रंग कम प्रभावी और सटीक है।

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नमूना को ठीक करने के लिए नमूना गरम करें गर्मी नमूने को स्लाइड का पालन करने की अनुमति देता है ताकि यह रगिंग प्रक्रिया के दौरान खो न जाए। बुनसेन बर्नर की लौ से दो या तीन बार स्लाइड स्लाइड में स्लाइड करें या एक विशेष इलेक्ट्रिक वॉटर का उपयोग करें। हालांकि, इसे विकृत होने से रोकने के लिए धब्बा को ज़्यादा गरम करने की कोशिश न करें। यदि आप बुनसेन की चोंच का उपयोग करते हैं, तो लौ को समायोजित करें ताकि यह एक छोटी नीली, लंबी और नारंगी शंकु न हो।

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स्लेजिंग ट्रे पर स्लाइड रखें। यह प्लास्टिक, कांच या धातु से बने एक छोटा सा उथले डिश होता है जो कि ऊपर की तरफ ग्रिल या तार जाल के साथ होता है। इस नेट पर स्लाइड रखें ताकि प्रयोग किया जाने वाला तरल प्लेट की प्लेट में चला सके।

भाग 2

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धीरे से क्रिस्टल वायलेट को कुल्ला। स्लाइड झुकाएं और आसुत जल की एक हल्की धारा के साथ धोने के लिए स्प्रे बोतल का उपयोग करें या टैप करें प्रवाह के बिना पानी सीधे प्रवाह के बिना धब्बा पर प्रवाह करना चाहिए। इस ऑपरेशन का अधिक से अधिक न करें क्योंकि आप ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरियल कोशिकाओं से दाग हटा सकते हैं।

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नमूना को आयोडीन के साथ और फिर पानी के साथ कुल्ला। इसके अलावा, एक विंदुक का उपयोग करें और आयोडीन के साथ धब्बा को कवर करें। 60 सेकंड तक प्रतीक्षा करें और फिर ऊपर वर्णित एक ही विधि से कुल्ला। आयोडीन, नकारात्मक आयनों के रूप में, कोशिकाओं के भीतर और बाहरी परतों के बीच बड़े क्रिस्टलाइन और आयोडीन (सीवी-आई) परिसरों के निर्माण के लिए सीवी + फलन के साथ संपर्क करता है। यह चरण उन कक्षों पर बैंगनी रंग को ठीक करने की अनुमति देता है जहां यह अवशोषित हो गया है।

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इस बिंदु पर नमूना decoloured है और एक जल्दी कुल्ला करने के लिए रवाना। इस चरण के लिए, एसीटोन और इथेनॉल के बराबर भागों का एक मिश्रण आमतौर पर इस्तेमाल किया जाता है। विरंजन के समय का सावधानीपूर्वक निरीक्षण किया जाना चाहिए। स्लाइड पकड़ो और इसे झुकाएं, ब्लीचिंग मिश्रण को तब तक जोड़ें जब तक कि आप कुल्ला झोंपड़ी में बैंगनी रंग को नहीं देखते। आम तौर पर, ब्लीच (या मिश्रण में एसीटोन की एकाग्रता अधिक होती है तो कम से कम 10 सेकंड का प्रवाह होता है)। जैसे ही सभी ग्राम-पॉजिटिव और नकारात्मक कोशिकाओं से सभी ज्येष्ठ वायलेट को हटा दिया गया हो, रोको या आपको फिर से दोबारा दोहराएं। ऊपर वर्णित विधि का उपयोग करके अतिरिक्त विरंजन मिश्रण को तुरंत कुल्ला।

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पृष्ठभूमि रंग के साथ धब्बा साफ करें और फिर इसे कुल्ला। पृष्ठभूमि का रंग, अधिकतर सफैनिन या फ़ूशिन का उपयोग गुलाबी या लाल के उत्तरार्द्ध (जो एसीटोन द्वारा प्रक्षालित किया गया है) रंगों के द्वारा ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के बीच के अंतर को बढ़ाने के लिए किया जाता है। दूसरे डाई को कम से कम 45 सेकंड के लिए छोड़ दें और फिर इसे कुल्ला दें।

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स्लाइड बहती है आप हवा में सूखने या इस उद्देश्य के लिए विशेष तौर पर डिज़ाइन किए गए शोषक कागज का उपयोग करने के लिए प्रतीक्षा कर सकते हैं। ग्राम का दाग अब पूरा हो गया है।

भाग 3

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ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया को पहचानें यह प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के साथ स्लाइड की जांच करता है - सकारात्मक मोटा कोशिका झिल्ली में फंसे क्रिस्टलीय वायलेट के कारण सकारात्मक बैक्टीरिया बैंगनी हो जाएगा। ग्राम-नकारात्मक गुलाबी या लाल हो जाएगा, क्योंकि जेंडर वायलेट को उनकी पतली सेल की दीवारों से "धोया गया" और पृष्ठभूमि डाई ने प्रवेश किया है।

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संदर्भ चित्र देखें यदि आपको यह सुनिश्चित नहीं है कि यह बैक्टीरिया क्या है, तो आप चित्रों का एक संग्रह देख सकते हैं, जिसे ग्राम आकृति और रंग से सूचीबद्ध किया गया है। आप कई ऑनलाइन डेटाबेस पा सकते हैं पहचान सरल बनाने के लिए, सबसे आम या अधिक चिकित्सकीय रूप से संबंधित बैक्टीरिया को ग्राम के दाग और आकार से वर्गीकृत किया जाता है।

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फार्म के आधार पर ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया को पहचानें। बैक्टीरिया, साथ ही रंग के लिए, सूक्ष्मदर्शी के नीचे प्रकट होने वाले आकार के अनुसार भी वर्गीकृत किया जाता है। सबसे सामान्य "कोसी" (गोलाकार) या छड़ (बेलनाकार) हैं। यहां ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया (रंगीन बैंगनी) के कुछ उदाहरण हैं, जिन्हें प्रपत्र द्वारा वर्गीकृत किया गया है:

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ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया को पहचानता है ये रंगीन गुलाबी होते हैं और इन्हें तीन समूहों में वर्गीकृत किया जाता है। एक गोलाकार आकार, लंबी और पतली छड़ और अंत में कोकॉइड्स जो एक मध्य मार्ग हैं, के साथ नारियल के पेड़।

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मिश्रित परिणाम रेट करें कुछ बैक्टीरिया उनके नाजुक या अभेद्य सेल दीवारों के कारण सही मूल्यांकन करना मुश्किल है। वे एक ही धब्बा में मौजूद एक ही प्रकार के बैक्टीरिया के लिए एक मिश्रित बैंगनी और गुलाबी रंग या विभिन्न रंग दिखा सकते हैं। 24 घंटे से अधिक उम्र के सभी नमूने इस समस्या को पेश करते हैं, लेकिन प्रत्येक चरण में बैक्टीरिया की खोज करने में मुश्किल होती है। इस मामले में, संभावनाओं की रेंज को कम करने और अपनी पहचान हासिल करने के लिए विशिष्ट परीक्षणों की ज़रूरत होती है, जैसे ज़िहल-नेल्सन धुंधला हो जाना, संस्कृति अवलोकन, आनुवांशिक परीक्षण और टीएसआई अगर

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सामग्री का निपटान एक ही प्रकार की सामग्री के आधार पर प्रयोगशाला से प्रयोगशाला तक सामग्री परिवर्तन को समाप्त करने की प्रक्रिया। आमतौर पर धुंधला ट्रे में तरल पदार्थ विशेष बोतलों में बंद होने के बाद खतरनाक अपशिष्ट के रूप में समाप्त हो जाते हैं। स्लाइड 10% ब्लीच समाधान में निष्फल हो जाती हैं और फिर तीखे उपकरणों के रूप में हटा दिया जाता है।